（征求意見稿）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒（以下簡稱乙肝病毒）DNA定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)乙肝病毒DNA定量檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補(bǔ)充。
本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。全球每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌（肝癌），肝癌患者中，75%以上由HBV所致。
我國屬HBV感染地方性流行區(qū)。根據(jù)2006年全國乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查，我國現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例，每年因HBV導(dǎo)致的肝硬化和肝癌死亡約30余萬例，新發(fā)乙型肝炎病例約50～100萬例。乙肝防治是當(dāng)前及今后相當(dāng)長時(shí)間內(nèi)要面臨的重要任務(wù)。
HBV是血源傳播性疾病，主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），基因組長約3.2 kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNA。急性乙型肝炎病毒感染HBV DNA存在先陽性后消失的發(fā)展過程，慢性乙型肝炎病毒感染的自然史一般可分為4個(gè)期，即免疫耐受期、免疫清除期、非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期和再活動(dòng)期，其中免疫耐受期HBV DNA滴度較高（大于20 000 IU/ml），免疫清除期表現(xiàn)為血清HBV DNA滴度大于2000 IU/ml，但一般低于免疫耐受期。非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期和再活動(dòng)期可表現(xiàn)為HBV DNA檢測(cè)不到（PCR法）或低于檢測(cè)下限。但并不是所有HBV感染者都經(jīng)歷以上四期。
HBV已發(fā)現(xiàn)有9個(gè)基因型（A～I(xiàn)），每個(gè)基因型又可分為不同亞型，且存在基因型之間的重組現(xiàn)象。我國已發(fā)現(xiàn)A、B、C、D基因型，中東部地區(qū)以B、C基因型占優(yōu)勢(shì)，其中北方地區(qū)（長江以北）主要為C2亞型；南方大部分地區(qū)流行株為B2、C2、C1亞型，并有少部分D基因型；西部地區(qū)尤其是新疆地區(qū)以D基因型為主，西部藏族居民中以C/D重組基因型為主；A型和B1亞型罕見。
乙肝病毒DNA定量檢測(cè)試劑是指利用包括實(shí)時(shí)熒光PCR或其他的分子生物學(xué)方法在內(nèi)的核酸檢測(cè)技術(shù)，以乙肝病毒基因序列為檢測(cè)目的，對(duì)人血清、血漿及其他人體樣本中的乙肝病毒DNA進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可作為乙肝輔助診斷的指標(biāo)之一，還可通過對(duì)血中HBV DNA水平的監(jiān)測(cè)，用于HBV感染的診斷、治療適應(yīng)證的選擇及抗病毒療效的判斷。本試劑不用作HBV的血源篩查。
本指導(dǎo)原則主要針對(duì)實(shí)時(shí)熒光PCR方法的乙肝病毒DNA定量檢測(cè)試劑，其它核酸定量檢測(cè)方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇適用自身方法學(xué)特性的研究步驟及方法。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及檢出限等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》（國食藥監(jiān)械[2007]609號(hào)）的相關(guān)要求。
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)乙肝病毒核酸檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。
1.【預(yù)期用途】 應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
（1）試劑盒用于定量檢測(cè)人血清和/或血漿等樣本中的乙肝病毒DNA，適用樣本類型的確定應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。
（2）待測(cè)人群特征介紹：主要為接受抗病毒治療的乙肝患者。
（3）臨床用途：主要通過對(duì)乙肝患者血中HBV DNA基線水平和變化情況的監(jiān)測(cè)，用于評(píng)估抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果監(jiān)測(cè)。（如有其它用途應(yīng)作特別說明。）
（4）強(qiáng)調(diào)：該檢測(cè)不得作為患者病情單獨(dú)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，必須結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)價(jià)。
（5）明確說明該檢測(cè)不得作為血液篩查HBV病毒的篩查試劑使用。
2.【主要組成成份】
（1）說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，定量標(biāo)準(zhǔn)品、陰/陽性對(duì)照品（或質(zhì)控品）可能含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號(hào)試劑盒中各組份是否可以互換。
（2） 試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組份，說明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、貨號(hào)及其它相關(guān)信息。
（3）如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號(hào)等詳細(xì)信息。
3.【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等。應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。
4.【樣本要求】
（1）樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：按照慢性乙型肝炎防治指南（2010年版或新版）采樣要求。
（2）對(duì)血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對(duì)采血管及抗凝劑的要求：明確樣本類型、采血管和抗凝劑。其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。
（3）樣本運(yùn)送、處理及保存：對(duì)血樣離心條件的要求，核酸提取前的預(yù)處理、保存條件及期限（短期、長期）、運(yùn)送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。如有需要應(yīng)對(duì)高于檢測(cè)范圍的樣本稀釋方法進(jìn)行規(guī)定。
5.【適用機(jī)型】注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
6.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：
（1）試驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度、空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。
（2）試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。
（3）詳述待測(cè)樣本及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品（質(zhì)控品）核酸提取的條件、步驟及注意事項(xiàng)。
（4）核酸提取/純化方法的詳細(xì)介紹。
（5）擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。
（6）PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。
（7）儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。
（8）基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法。
（9）定標(biāo)方法的描述。
（10）實(shí)驗(yàn)的有效性判斷：試劑盒內(nèi)陰/陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）的Ct值要求（包括內(nèi)標(biāo)）。
7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用IU/mL表示，結(jié)合陰陽性質(zhì)控結(jié)果，對(duì)低于檢出限未檢出、低于定量限、檢測(cè)范圍內(nèi)及高于檢測(cè)范圍的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行界定。
8．【檢驗(yàn)方法局限性】
（1）本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
（2）不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理過程均有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。
（3）臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》配備設(shè)備及操作人員，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行操作。
（4）明確該檢測(cè)僅限于規(guī)定的樣本類型及適用機(jī)型。
9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：
（1）對(duì)相應(yīng)國家參考品檢測(cè)的符合情況。
（2）最低檢出限及定量限：說明試劑不同樣本類型的最低檢出濃度和最低定量濃度，簡單介紹最低檢出限/定量限的確定方法以及對(duì)最低檢出限/定量限驗(yàn)證所采用的基因型。
（3）精密度：精密度參考品的組分、濃度及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
（4）線性范圍：確定線性范圍的方法、濃度范圍、相關(guān)系數(shù)等信息。
（5）對(duì)不同基因型的覆蓋：驗(yàn)證該試劑對(duì)不同基因型的檢測(cè)效果。
（6）分析特異性：
①臨床特異性：應(yīng)采用一定數(shù)量的臨床HBV DNA陰性樣本進(jìn)行驗(yàn)證。
②交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其它病原體核酸的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式表示經(jīng)過交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱、型別、濃度等信息；
③干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等，應(yīng)注明可接受的最高限值；
④藥物影響：常用抗病毒藥物、干擾素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。
（7）對(duì)比試驗(yàn)研究（如有）：簡要介紹參比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。
10.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
（1）有關(guān)人源組份（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其它可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對(duì)待。
（2）實(shí)驗(yàn)室管理應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)人員必須進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)；實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)），實(shí)驗(yàn)操作的每個(gè)階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)各階段用品不得交叉使用；各區(qū)間人員流動(dòng)及空氣流向應(yīng)有嚴(yán)格要求，最大限度避免交叉污染；實(shí)驗(yàn)用消耗品（如離心管、吸頭等）應(yīng)有合理的清潔和質(zhì)檢程序，避免污染或擴(kuò)增反應(yīng)抑制物造成假陰性結(jié)果。
（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明
擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于首次申報(bào)注冊(cè)的國產(chǎn)試劑，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。附錄中應(yīng)將待測(cè)靶基因的基因位點(diǎn)、全序列，引物/探針序列、來源及驗(yàn)證情況，各種酶的來源、特性以驗(yàn)證情況等信息的重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。
乙肝病毒核酸定量檢測(cè)試劑的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)符合國家參考品檢測(cè)要求。產(chǎn)品的性能指標(biāo)應(yīng)與說明書內(nèi)容相符。
如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。
根據(jù)《辦法》要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。對(duì)于已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品的乙肝病毒項(xiàng)目，在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行。
應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料來自市場(chǎng)（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對(duì)物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。
1.企業(yè)內(nèi)部參考品的制備、定值過程。建議采用滅活病毒建立參考品，不宜使用質(zhì)粒。
2．核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。
3．PCR組分的主要材料（包括引物、探針、內(nèi)標(biāo)、各種酶及其它主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：
（1） 脫氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。
（2）引物
由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。對(duì)序列準(zhǔn)確性、純度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證。如為外購，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。
（3） 探針
特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。純度應(yīng)達(dá)到HPLC純，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。
（4） PCR反應(yīng)所需酶
DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性；尿嘧啶糖基化酶（UNG），具有尿嘧啶糖基化活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證；應(yīng)提供有關(guān)保存穩(wěn)定性、活性及功能實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。
4．內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）、定標(biāo)品、對(duì)照品（質(zhì)控品）的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。內(nèi)標(biāo)可采用滅活的病毒或缺陷病毒（假病毒）、質(zhì)粒。定標(biāo)品及外部陽性對(duì)照宜采用滅活病毒或假病毒。
5．核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無DNase和RNase污染。
（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
基本生產(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。
生產(chǎn)工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：
1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。
2.反應(yīng)原理介紹。
3.基因位點(diǎn)選擇、PCR方法學(xué)特性介紹。
4.DNA提取純化方法優(yōu)化，建議包含純化步驟，內(nèi)標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品均應(yīng)全程參與提取純化。不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。
5.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。樣本量應(yīng)不少于200微升、加樣量應(yīng)不少于20微升、反應(yīng)體積應(yīng)不少于40微升。
6.確定最適PCR反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。
7．對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研究資料。
8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。
另外，對(duì)于試劑盒的內(nèi)標(biāo)、定標(biāo)品、對(duì)照（質(zhì)控）品設(shè)置，建議企業(yè)參考以下要求執(zhí)行：
（1）乙肝病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒的外部對(duì)照（質(zhì)控）品應(yīng)至少設(shè)置三個(gè)量級(jí)水平的系列定標(biāo)品:臨界陽性對(duì)照（質(zhì)控）品、強(qiáng)陽性對(duì)照（質(zhì)控）品和陰性對(duì)照（質(zhì)控）品，定標(biāo)品和質(zhì)控品均應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種對(duì)照（質(zhì)控）品的Ct值做出明確的范圍要求。注意，建議采用與實(shí)際檢測(cè)樣本具有相同或相似性狀的基質(zhì)溶液作為陰性對(duì)照（質(zhì)控）品，不推薦采用水作為陰性對(duì)照（質(zhì)控）品。
（2）樣本反應(yīng)管應(yīng)設(shè)置合理的內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）以對(duì)管內(nèi)抑制可能造成的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線但又不能對(duì)目的基因的檢測(cè)造成競(jìng)爭(zhēng)性抑制而導(dǎo)致假陰性。對(duì)內(nèi)標(biāo)的Ct值也應(yīng)有明確的范圍要求。
企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、臨床樣本來源等。分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。對(duì)于乙肝病毒核酸定量類檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。
1、乙肝病毒核酸（DNA）提取
病毒DNA提取主要有以下目的：富集靶核酸濃度、保證靶核酸序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是決定PCR成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，無論申報(bào)產(chǎn)品是否含有DNA分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)對(duì)核酸提取的環(huán)節(jié)做詳細(xì)的驗(yàn)證。臨床標(biāo)本中可能含有各式各樣的PCR抑制物，因此，對(duì)于DNA提取試劑的選擇，除最大量分離出目的DNA外，還應(yīng)有純化步驟，盡可能去除PCR抑制物。常見的DNA分離純化方法（如酚抽提法、甲酰胺解聚法等）和改良方法各有優(yōu)勢(shì)和不足，申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品的特性，合理選擇DNA分離/純化試劑，并提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料（提取效率、與后續(xù)試驗(yàn)的配合等）。
2、最低檢測(cè)限（分析靈敏度）
（1）最低檢測(cè)限與定量限的確定
建議使用國際標(biāo)準(zhǔn)品/國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行最低檢測(cè)限確定，使用多份標(biāo)準(zhǔn)品制備梯度病毒稀釋液、每個(gè)梯度的病毒稀釋液重復(fù)適當(dāng)次數(shù)（4次），將具有95%以上陽性檢出率的病毒水平作為最低檢測(cè)限。建議最低檢測(cè)限應(yīng)≤30IU/mL。
定量限應(yīng)高于或等于檢測(cè)限，將多次（至少10次）測(cè)量的計(jì)算誤差符合試劑準(zhǔn)確度研究規(guī)定的誤差要求的最低病毒水平作為最低定量限。
（2）最低檢測(cè)限和定量限的驗(yàn)證
申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢測(cè)限或接近最低檢測(cè)限的病毒濃度對(duì)國內(nèi)常見（至少包括B、C、D型）基因型進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于60次。定量限的驗(yàn)證應(yīng)對(duì)國內(nèi)常見（至少包括B、C、D型）基因型進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于40次。
對(duì)此，企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢出限/定量限驗(yàn)證的各個(gè)病毒株的來源、型別確認(rèn)及滴度確認(rèn)試驗(yàn)等信息。
3.線性范圍
線性范圍確定的研究應(yīng)使用高值臨床樣本（由可溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品/國際標(biāo)準(zhǔn)品的方法定量）進(jìn)行梯度稀釋，稀釋劑應(yīng)使用經(jīng)確認(rèn)為陰性的混合人血清或血漿，應(yīng)包含9-13個(gè)濃度（應(yīng)包含接近最低檢測(cè)限的臨界值濃度），使用至少3個(gè)批次的試劑進(jìn)行試驗(yàn)。通過評(píng)價(jià)一定范圍內(nèi)的線性關(guān)系及各水平的準(zhǔn)確度確定該方法的線性范圍。
4. 準(zhǔn)確度
對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析、回收實(shí)驗(yàn)、方法學(xué)比對(duì)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。
（1） 與國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)研究
該檢測(cè)有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果的偏差情況。
（2） 回收試驗(yàn)。用于評(píng)估定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確測(cè)定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對(duì)樣本進(jìn)行3-5次回收試驗(yàn)，取平均值即平均回收率。
回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：
① 加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；
② 盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測(cè)物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；
③標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；
④ 注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測(cè)樣本接近的基質(zhì)。
（3）方法學(xué)比對(duì)
采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品，從測(cè)定結(jié)果間的相關(guān)性了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的一致情況。如顯著相關(guān)，說明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生顯著差異結(jié)果。
在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和參比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
5.精密度
測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。
（1）對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括提取組分和PCR組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)PCR分析儀、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。
（2）合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
（3）用于精密度評(píng)價(jià)的質(zhì)控品應(yīng)至少包括四個(gè)水平:
①陰性質(zhì)控品：不含HBV DNA的質(zhì)控品，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。
②臨界陽性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度略高于試劑盒的最低檢測(cè)限，陽性檢出率應(yīng)高于95%（n≥20）。
③弱陽性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈弱陽性（高于定量限濃度1個(gè)數(shù)量級(jí)），陽性檢出率為100%且變異系數(shù)（CV）符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。
④強(qiáng)陽性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈中度至強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%且變異系數(shù)（CV）符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。
另外，建議申請(qǐng)人選擇適量臨床采集的新鮮病人樣本（包括所有樣本類型）作為無定值質(zhì)控品進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，以更好地模仿臨床檢測(cè)環(huán)境。
6.HBV不同基因型的覆蓋
應(yīng)對(duì)乙肝病毒國內(nèi)常見基因型（至少包括B、C、D型）進(jìn)行檢測(cè)，重點(diǎn)考察各基因型病毒樣本的最低檢測(cè)限、準(zhǔn)確性及精密度指標(biāo)；每個(gè)基因型的病毒樣本稀釋成至少3個(gè)濃度水平，對(duì)每水平樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定?？疾烀糠N基因型樣本的準(zhǔn)確度和精密度，以評(píng)價(jià)試劑的包容性。
7.分析特異性
（1）交叉反應(yīng)
①用于乙肝病毒核酸檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀。（見表1）。
②建議在病毒和細(xì)菌感染的的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為106 cfu/ml或更高，病毒為105 pfu/ml或更高。
③申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中有所體現(xiàn)。
表1 用于交叉反應(yīng)研究的微生物（推薦）
微生物 |
人巨細(xì)胞病毒 |
E-B病毒 |
人類免疫缺陷病毒 |
丙型肝炎病毒 |
甲型肝炎病毒 |
人類T細(xì)胞親淋巴病毒Ⅰ型 |
人類T細(xì)胞親淋巴病毒II型 |
人類皰疹病毒6型 |
單純皰疹病毒1型 |
單純皰疹病毒2型 |
甲型流感病毒 |
痤瘡丙酸桿菌 (PA) |
金黃色葡萄球菌 (SA) |
白色念珠菌 (CA) |
（2）干擾物質(zhì)
①潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（見表2）和常用的治療藥物如普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干擾素α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）]、拉米夫定（lamivudine）、阿德福韋酯（adefovir dipivoxil）、恩替卡韋（entecavir）、替比夫定（telbivudine）等。
②使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進(jìn)行驗(yàn)證，另外，亦建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于常見藥物干擾試驗(yàn)，建議參照相應(yīng)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗(yàn)證，并建議添加最大治療藥物劑量做最差條件驗(yàn)證。
③建議在病毒的檢測(cè)臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。
表2 建議用于干擾研究的物質(zhì)（推薦）
物質(zhì) |
人白蛋白 |
膽紅素* |
游離血紅蛋白* |
甘油三酯* |
系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血 |
抗核抗體 |
類風(fēng)濕因子 |
總IgG* |
*為必須驗(yàn)證的干擾物質(zhì)。
8.溯源性
應(yīng)提交詳細(xì)的溯源性研究資料。企業(yè)制備的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品、二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品、用于制備商品化標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)備液以及不同基因型的陽性樣本均應(yīng)能夠溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)品/國家標(biāo)準(zhǔn)品。使用國家標(biāo)準(zhǔn)品/國際標(biāo)準(zhǔn)品為定標(biāo)品，應(yīng)用多臺(tái)儀器對(duì)企業(yè)一級(jí)定標(biāo)品進(jìn)行定標(biāo)，以下逐級(jí)對(duì)企業(yè)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品、定標(biāo)儲(chǔ)備液、陽性參考品（質(zhì)控）進(jìn)行定標(biāo)。
9. 其它需注意問題
對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。
對(duì)于此類試劑，正常人群中不應(yīng)檢出HBV DNA，因此不存在cut-off值或參考值范圍。參考值確定資料主要是指Ct值的確認(rèn)資料，建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇3-5個(gè)溫度點(diǎn)（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。在對(duì)樣本進(jìn)行效期穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)時(shí)，同時(shí)應(yīng)對(duì)推薦使用的抗凝劑及采血管進(jìn)行合理驗(yàn)證。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。
1. 研究方法
對(duì)于該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。
建議預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇兩種參比試劑同時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證，考察其誤差范圍，選擇其中一種作為正式試驗(yàn)的參比試劑，另一種作為第三方驗(yàn)證試劑。選擇的參比試劑樣本類型及檢測(cè)范圍應(yīng)能夠涵蓋考核試劑的相關(guān)樣本及檢測(cè)性能，以免造成考核試劑部分性能無法驗(yàn)證的情況。
對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不一致（包括是否檢出及檢測(cè)值差異較大的）的樣本應(yīng)采用公認(rèn)較好的第三方試劑進(jìn)行驗(yàn)證。
2. 臨床研究單位的選擇
建議申請(qǐng)人在選擇臨床單位時(shí)，應(yīng)考慮到各試驗(yàn)單位之間的平行性和一定的地域代表性；臨床研究單位應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比方法都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
3.臨床試驗(yàn)方案
臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同時(shí)方案中應(yīng)明確確證試劑及方法。
4．病例選擇及樣本類型
臨床試驗(yàn)應(yīng)至少進(jìn)行500例病例的試驗(yàn)，其中應(yīng)主要選擇乙型肝炎患者（陽性樣本），在病例選擇時(shí)應(yīng)考慮到地域性的差別，應(yīng)涵蓋不少于10例常見的D基因型，應(yīng)注重不同藥物治療的乙肝病人。陽性樣本應(yīng)覆蓋試劑線性范圍，均勻分布高、中、低值。建議選擇不多于50例的HBV陰性樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，陰性樣本不應(yīng)全部采用健康人群樣本，而應(yīng)考慮可能存在交叉反應(yīng)相關(guān)的病例如丙型肝炎等其他肝炎病毒感染病例及其他良性或惡性肝臟疾病患者，以從臨床角度考察其分析特異性。
臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測(cè)中常用的樣本類型。對(duì)于同時(shí)能夠檢測(cè)血清和血漿樣本的試劑，應(yīng)至少進(jìn)行50例在同一HBV患者分別采集的血清和血漿樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)研究，陽性樣本應(yīng)包括強(qiáng)、中、弱陽性及部分陰性樣本。
臨床樣本應(yīng)以新鮮樣本為主，如采用庫存樣本應(yīng)另行說明 。
5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常用相關(guān)性、線性回歸對(duì)log10滴度結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考察兩組數(shù)據(jù)之間是否存在相關(guān)性。常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
6. 結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證
在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。
7. 臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫
根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。
（1）臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述
① 臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。
② 病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。
③ 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。
④ 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。
（2） 具體的臨床試驗(yàn)情況
① 申報(bào)試劑和參比試劑的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息。
② 對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。
③ 質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。
④ 具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。
（3） 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
① 數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。
② 兩組數(shù)據(jù)結(jié)果的相關(guān)性、線性回歸的結(jié)果。
③對(duì)相關(guān)性及線性方程的顯著性檢驗(yàn)，驗(yàn)證兩種試劑定量結(jié)果的一致性。
④陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。
⑤以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。
另外考慮到對(duì)不同樣本類型的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定差異，故建議對(duì)不同樣本類型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 以對(duì)考核試劑的臨床性能進(jìn)行綜合分析。
（4） 討論和結(jié)論
對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。
1.分析特異性（analytical Specificity）：測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量物的能力。分析特異性用于描述檢測(cè)程序在樣本中有其它物質(zhì)存在時(shí)只測(cè)量被測(cè)量物的能力。通常以一個(gè)被評(píng)估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。
注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物。
2.精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。
1. 《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》，（國食藥監(jiān)械[2007]229號(hào)），2007年4月19日。
2. 《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，（國食藥監(jiān)械[2007]240號(hào)），2007年4月28日。
3. 《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》，（國食藥監(jiān)械[2007]240號(hào)），2007年4月28日。
4. 李金明，《實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)》，第一版，人民軍醫(yī)出版社，2007。
5. 《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社。
6. 莊輝 ，乙型肝炎流行病學(xué)研究進(jìn)展，中國醫(yī)學(xué)前沿雜志2009年第1卷第2期。
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10.封波，慢性乙型肝炎抗病毒治療研究進(jìn)展-來自2010年美國肝病學(xué)會(huì)年會(huì)的報(bào)告，《中國醫(yī)學(xué)前沿雜志（電子版）》2011 年 第 3 卷 第 1 期。
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